miércoles, 8 de junio de 2011

Determinacion de Acido Urico

  • Objetivo
Determinar la cantidad de acido urico en suero, meditante la utilizacion del espectrofotometro

  • Procedimiento
  1. Realizar puncion venosa para extaer sangre.
 
  1. Colocar la sangre en un tubo y centrifugar por 5 minutos.
  2. Extraer el suero y colocarlo en un tubo de ensaye aparte y marcarlo con el nombre de Muestra.
  3. Marcar otros 2 tubos como Blanco y Estandar; en el tubo marcado como ''blanco'' colocar 1ml de reactivo, en el ''estandar'' 1ml de reactivo mas 1ml de reactivo estandar.
  4. Mezclar los tubos e incubar 5 minutos a 37º
  5. Calibrar el espectrofotometro con el tubo de ''blanco''.
  6. Introducir y leer las absorbancias del ''estandar'' y la ''muestra''.
  7. Realizar los calculos

lunes, 6 de junio de 2011

Determinacion de TP &TPT

MATERIAL:
  • 1 Baño maria 
  • Pipetas
  • Tubos de enasye 
Procedimiento:
  1. Realizar puncion venosa.
  2. Mezclar inmediatamernte la sangre con el anticuagulante.
  3. Centrifugar la muetra a 1500 x 15min.
  4. Separa el plasma del suero.
  5. Colocar el reactivo1 en la muestra.
  6. Calentar a 37ºC.
  7. Mezclar y pipetiar el  reactivo2
  8. Incubar 5min.
  9. Calcular en el espextrofotametro.
Los valores de referencia pueden ser:
PT (seg.)13-17seg.
PT (seg.)70-120%.
PT (tasa)0,9-1,2.

Observacion de muestras diversas empleando el microscopio.

Materiales:
  • 1 Microscopio.
  • 3 Portaobjeto & 3 Cubreobjeto.
  • Aceite de inmersión.
  • Sangre con EDTA.

Procedimiento:
Para observar diversas muestras en el microscopio es necesario seguir los siguientes pasos;
  1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicion de empleo y bajar la platina completamente.
  2. Colocar la preparacion sobre la platina sujetandola con las pinzas metalicas.
  3. Comenzar la observacion con el objetivo de 4x o 10x.
  4. Acercar al maximo la lente del objetivo al porta objeto empleando el tornillo macrometrico.
  5. Mirar atraves de los oculares ir separando lentamente el objetivo del portaobjeto con el macrometrico y, cuando se observe algo nitida la muestra, girar el micrometrico  hasta obtener un enfoque fino.
  6. Y asi hasta que observen las otras muestras

domingo, 5 de junio de 2011

Aplicación de esterilizacion por calor seco empleando horno de esterilización

Materiales:

1 horno de esterilización
5 cajas petri
2 matraces 250 ml
2 probetas de  250 ml
1 rollo de papel estraza
1 cinta 
Procedimiento:
Primero envolvimos  el material con el papel estraza y la cinta, seguidamente encendimos el horno de esterilización  y con el termostato elevamos la temperatura  hasta que llego a 121 °C y  mantuvimos esta temperatura, después introducimos el material a esterilizar y cerramos la puerta , esperamos que se exponga  a la temperatura 15 minutos  y después de este periodo apagamos el horno,  y como estaba caliente sacamos los materiales con unos guantes de asbesto
Conclusión:
Se logro conocer la esterilización por el método de calor en seco empleando el horno de esterilización , observando las ventajas y desventajas de este equipo.





"APLICACIÓN DE ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO, EMPLEANDO LA AUTOCLAVE"

Materiales:
-1 Autoclave
-6 cajas petri
- 1 matraz erlenmeyer
- Abata lenguas
- Isopos
- Gasas
- Algodón
- Cinta
- Papel estraza

Procedimiento:
Envolver con papel estraza, los abata lenguas, los isopos, y las cajas petri, al matraz se le crea un tampon con el algodón y  la gasa y al final lo envuelves todo con cinta, una vez ya terminado se le pone el tampon en la boca del matraz. Checas si hay un buen nivel de agua en el autoclave, habres la válvula de salida de vapor y enciendes la fuente de calor del autoclave, checas el termómetro para ver si sube la temperatura una vez ya subida empezara a salir vapor por la válvula ( a esto se le llama purgar el autoclave) cuando ya se purgo, cierras la válvula de salida de vapor y dejas que la presión suba hasta 15 libras por pulgada cuadrada ( checas el macro metro) lo que proporciona una temperatura de 121 °C, esperas 15 minutos a 15 libras de presión  apagas la fuente de calor, dejas que se enfrié, no se habré la válvula de salida de vapor, hasta que haiga bajado a 0 libras, cuando ya aiga llegado puedes sacar los materiales.

Conclusión:
Con esta practica se llega a la conclusión de que al emplear el autoclave los materiales quedan libres de bacterias para que así se puedan usar sin ningún riesgo.





PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS EMPLEANDO BALANZAS GRANATARIAS Y ANALÍTICAS



materiales :
matraz elenmeyer
balanza  granataria
autoclave
espatula
agar verde brillante , agar hierro de hierro  de kliger.
cajas  petri
mechero bunzen

utiliza un matraz lo suficiente grande para  que permita una  agitación y un mezclado  correcto. por ejemplo si se  van a preparar 500 ml de medio de  cultivo use  un matraz  de un litro.

pesar en la  balanza granataria lo  correspondiente al numero de  cajas  petri , establecer si la balanza  esta  calibrada y  tarar para  hacer la operación del pesado.

PROCEDIMIENTO.
primero  tuvimos  que  calibrar  la  balanza y ya  de  estar  calibrada pesar la hoja  y después  pesar la  cantidad  necesaria de  agar , se  midieron  250  ml de  agua  que  se traspaso al matraz Elemeyer donde se le    
coloco el agar  , se prendió la  estufa  y se puso a calentar el cultivo con los  agitadores de  vidrio y tener  que  esperar a que empiece a hacer  ebullición.

termino este procedimiento y se le puso el tapón y se coloco en el autoclave.
después  se tuvieron que pasar en 6 cajas petri con la ayuda del mechero bunzen y ya  que  terminamos  de  vaciarlos pues terminamos la practica.

una  vez gelificados , se  procederán a guardar los medios de  cultivo entre 2  y  8 grados , sin embargo aveces se  guardan  a  30  grados primero asegurar  que  estén esteriles y segundo para  estimular el crecimiento.

Equipos de laboratorio 1:

El microscopio

 

El microscopio que se utiliza en nuestro laboratorio es el microscopio binocular modelo WB-3. Se utiliza en las areas de 

  • microbiologia
  • bacteriologia
  • parasitologia
  • Sistema óptico
    • OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
    • OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
    • CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
    • DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
    • FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
  • Sistema mecánico
    • SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
    • PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
    • CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, …..
    • REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.
    • TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto.
        MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
  1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.
  2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
  3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
  4. Para realizar el enfoque:
    1. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
    2. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
  5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.
  6. Empleo del objetivo de inmersión:
    1. Bajar totalmente la platina.
    2. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
    3. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.
    4. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
    5. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
    6. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
    7. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
    8. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
    9. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
    10. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

AUTOCLAVE

El autoclave que utilizamos en el laboratorio es de calor humedo, se utiliza para esterilizar los materiales.
Un autoclave es un recipiente metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua. Su construcción debe ser tal que resista la presión y temperatura desarrollada en su interior. La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a su punto de ebullición. La temperatura y el vapor actuando conjuntamente producen la coagulación de las proteínas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproducción de estos, llevando así a su destrucción.
Del punto de vista industrial, equipos que funcionan por el mismo principio tienen otros usos aunque varios se relacionan con la destrucción de los microorganismos con fines de conservación de alimentosmedicamentos, y otros productos.
La palabra autoclave no se limita a los equipos que funcionan con vapor de agua ya que los equipos utilizados para esterilizar con óxido de etileno se denominan de la misma forma.
Partes frontales que conforman los autoclaves
1.- Piloto indicador de falta de agua.
2.- Piloto línea.
3.- Apagador.
4.- Piloto termostato.
5.- Manómetro lector de presión en cámara.
6.- Manómetro lector de presión en camisa.
7.- Control central de operaciones.
8.- Puerta.
9.- Sistema de cerrado.
10.- Volante giratorio para abrir y cerrar la puerta.
11 .-Termómetro lector de temperatura en cámara.
12.- Nivel de agua.
13.- Entrada de agua.
14.- Drenaje.


CENTRIFUGA

En el laboratorio se utiliza la centrifuga salbot I-GOO y separa plasma y suero.
Una centrífuga es una máquina que pone en rotación una muestra para separar por fuerza centrífuga sus componentes o fases (generalmente una sólida y una líquida), en función de su densidad.
Existen diversos tipos de estos, comúnmente para objetivos específicos.
Una aplicación típica consiste en acelerar el proceso de sedimentación, dividiendo el plasma y elsuero en un proceso de análisis de laboratorio.
También se utiliza para determinar el grupo sanguíneo mediante una toma de muestra capilar. En este caso la máquina utilizada se denomina microcentrífuga.
Es muy usada en laboratorios de control de calidad, de fabricas que elaboran zumos a base de citricos, para controlar el nivel de pulpa fina de estos, separando la pulpa fina del zumo exprimido.
Otra aplicación de las centrífugas es la elaboración de aceite de oliva. En ella las aceitunas una vez molidas y batidas se introducen en una centrífuga horizontal en la que se separa el aceite que es la fracción menos pesada del resto de componentes de la aceituna; agua, hueso, pulpa etc.
Las centrifugadoras utilizan instrumentos llamados butirómetros para medir el grado de grasa o crema que contiene la leche, existen diferentes tipos de butirometro para crema, manteca, etc.

HORNO DE ESTERILIZACIÓN

El horno de esterilizacion que se utiliza en el laboratorio es el H-33 Y esteriliza termometros y las areas en que se manejan son industrias en general.
La esterilización por calor seco se utiliza generalmente para materiales que toleran altas temperaturas, generalmente de metal o vidrio. Es el método de elección siempre que sea posible, pues la superficie del material de vidrio, al ser la que está en mayor contacto con el producto, puede ser origen de contaminación pirogénica, siendo el calor seco un buen agente de destrucción de pirógenos. Además tiene la ventaja de que, al finalizar el ciclo, el material sale seco.